ワンステップ融解プロトコルの有効性と安全性（F&S Rep. 2026）

はじめに
ポイント
引用文献
論文内容
私見

はじめに

胚のガラス化保存および融解は、生殖補助医療において必須の技術となっています。従来の多段階融解法（multi-step warming：MSW）は数百万件の胚で高い生存率が証明された確立された手法ですが、凍結保護物質（CPA）への長時間曝露は依然として卵子・胚に対して細胞毒性を有します。近年、CPA曝露時間と手技時間を大幅に短縮できるワンステップ融解法（one-step warming：OSW）が注目されており、生存率や妊娠率は従来法と同等で、手技時間を14分以上短縮できることが報告されています。一方で、これまでの報告の多くは予後良好な患者の高グレード胚に限定されており、形態不良胚や発育の遅い胚、高年齢患者由来胚などに対する安全性は未解明でした。今回、3施設1303個の胚を用いて、サブグループ別に有効性と安全性を検討したレトロスペクティブコホート研究をご紹介いたします。

ポイント

ワンステップ融解は手技時間を90％以上短縮しつつ、低グレード胚や高年齢患者でも従来法と同等の生存率・妊娠率・出生率を示しました。

引用文献

Ebinger ER, et al. F&S Rep. 2026. doi: 10.1016/j.xfre.2026.04.004.

論文内容

ガラス化保存胚盤胞のワンステップ融解法が、生存率および臨床アウトカムに及ぼす影響を、連続症例コホートで検討することを目的としたレトロスペクティブコホート研究です。2023年8月から2025年4月に、オーストラリアのAdora Fertilityの3施設で凍結融解胚移植を受けた950例の患者から得られた1303個の単一胚移植が解析対象となりました。2024年7月までの全症例は従来の多段階融解法（1Mスクロース1分→0.5Mスクロース3分→洗浄液10分）で実施され、2024年7月以降は全症例がワンステップ融解法（1Mスクロース1分のみ）に切り替えられました。
ガラス化保存にはVitrifit™（CooperSurgical）を用い、溶液1（10mM HEPES、最大10分）、溶液2（8%エチレングリコール+8% DMSO、2分）、溶液3（16%エチレングリコール+16% DMSO+0.68Mトレハロース、20-30秒）の3段階で37℃で実施されました。ガラス化保存前にレーザーパルスまたは175/275µm Stripper Tips™（CooperSurgical）を用いた手動操作によりtrophectodermのcell-cell junctionで人工的に収縮（artificial collapse）させてから個別にガラス化保存されています。融解についてはMSWではSage（CooperSurgical）の1Mスクロース・0.5Mスクロース・MOPS溶液を、OSWではSage Warming Kit（CooperSurgical）の1Mスクロース溶液のみを使用しています。
凍結基準は、D5またはD6で胚盤胞発育に至った胚で、形態評価は拡張度・外観・細胞数に基づきG1（top quality）、G2（good quality）に分類されました。形態不良胚（poor morphology）はFigure 1のフローチャート上で解析対象から除外されており（MSW群n=7、OSW群n=7）、本解析はG1とG2の胚のみを対象としています。
主要評価項目は生存率、臨床妊娠率（CPR）、継続妊娠率（OPR）、出生率（LBR）で、母体年齢、胚形態、ガラス化日、受精方法でのサブグループ解析も実施しました。年齢の非線形効果を考慮するため一般化加法モデル（GAM）が用いられ、患者IDをランダム切片として組み込まれました。

結果

全体の生存率はMSW群98.6％ vs OSW群98.4％（p=0.63）と同等でした。生化学的妊娠率は46.0％ vs 47.5％（p=0.74）、CPRは43.2％ vs 44.4％（p=0.87）、OPRは34.3％ vs 37.9％（p=0.27）と両群間で有意差はありませんでした。年齢別解析では、32歳時点でCPR 42.6％ vs 47.4％、OPR 34.9％ vs 39.6％、42歳時点でCPR 25.8％ vs 20.7％、OPR 12.6％ vs 12.9％（いずれもp>0.05）と、どの年齢でも両群間に有意な交互作用は認められませんでした。胚形態別では、最高品質胚（G1）はCPR 52.5％（MSW）vs 55.9％（OSW）、OPR 45.7％ vs 49.2％、良質胚（G2）はCPR 39.0％ vs 39.4％、OPR 29.2％ vs 33.0％（いずれもp>0.05）でした。G2胚はG1胚に比べ妊娠率が有意に低かった（平均46％低い、p<0.0001）ものの、両融解群間に有意差はありませんでした。Day 5胚とDay 6胚の比較では、D5胚はCPR 45.5％ vs 46.5％、OPR 36.3％ vs 40.2％、D6胚はCPR 27.3％ vs 27.6％、OPR 18.2％ vs 22.4％（いずれもp>0.05）でした。男性因子不妊によるICSI胚と通常IVF胚の比較でも、ICSI胚はCPR 42.3％ vs 40.7％、OPR 35.6％ vs 34.5％、IVF胚はCPR 45.7％ vs 46.8％、OPR 35.5％ vs 41.5％（いずれもp>0.05）と同等でした。出生率は1239件の移植中430児の出生（MSW: 234、OSW: 196）で、MSW 34.0％ vs OSW 35.6％（年齢・胚質・ガラス化日で調整後 p=0.908）と同等でした。出生体重はMSW 3477.2g vs OSW 3574.6g（p=0.0619）、母体合併症率はMSW 17.1％ vs OSW 16.8％（p=0.94）、新生児合併症率はMSW 2.1％ vs OSW 1.0％（p=0.46）と、いずれも両群間に有意差はありませんでした。

私見

ワンステップ融解法は手技時間を90％以上短縮し、CPA曝露時間とroom air exposure時間を減らせます。本研究の特長は、これまでの報告では検討されていなかったD6胚、男性因子不妊由来胚、高齢患者由来胚を含むサブグループでも、従来法と同等の成績が得られたことを示した点にあります。（本当の低グレード胚は一部除外されています）
先行報告との対比は以下のとおりです。

肯定派：
Liebermann J, et al. Reprod Biomed Online. 2024
ワンステップ法で生存率・CPRが同等で、OPR改善・流産率低下が報告されました。Manns J, et al. Fertil Steril. 2022
着床率・妊娠率は同等でした。
Lammers J, et al. Reprod Sci. 2025、Jiang VS, et al. J Assist Reprod Genet. 2024、Weidenbaum EM, et al. Fertil Steril. 2024
いずれも出生率同等を報告しています。
Fucci R, et al. Reprod Biomed Online. 2025
分割期胚のワンステップ融解で流産率低下が報告されました。
Shioya M, et al. Hum Reprod. 2025
分割期胚→胚盤胞発育率も同等としています。
Regincos M, et al. Hum Reprod. 2025
低グレード胚でも従来法と差がないことが示されました。
慎重派：
Ezoe K, et al. Reprod Biomed Online. 2025
in vitro実験で、ワンステップ融解により胚の過剰膨張（overexpansion）が生じ、栄養外胚葉の細胞溶解を起こす可能性を指摘しています。